MFG-E8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421639
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MFG-E8 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MFG-E8, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MFG-E8 Anticuerpo (H-3): sc-377356
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MFG-E8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421639 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Mfge8 codifica el factor 8 del dominio EGF de la envoltura del glóbulo graso de la leche (MFG-E8), una glicoproteína secretada que actúa como puente entre la fosfatidilserina presente en células apoptóticas y las integrinas de los fagocitos, como ITGAV/ITGB3 e ITGAV/ITGB5, lo que favorece la eferocitosis y limita la necrosis secundaria. Mediante esta actividad similar a la opsonización, MFG-E8 influye en la homeostasis inmunitaria, la resolución de la inflamación y la remodelación tisular, con efectos posteriores sobre la señalización de citocinas y los estados de activación de los macrófagos. En sistemas murinos, la alteración de la función de Mfge8 se ha relacionado con una depuración desregulada de células moribundas, fenotipos de inflamación crónica y respuestas de reparación deterioradas en contextos vasculares, metabólicos y neuroinflamatorios.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MFG-E8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mfge8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mfge8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mfge8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MFG-E8.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mfge8 para la investigación de la señalización de MFG-E8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Mfge8 críticos para la función de MFG-E8
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mfge8 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MFG-E8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MFG-E8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mfge8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MFG-E8 (m) y el plásmido HDR MFG-E8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mfge8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mfge8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.