MFF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402756

Übersicht

Humanes MFF (mitochondrial fission factor) ist ein Adapterprotein der äußeren Mitochondrienmembran, das die dynaminverwandte GTPase DRP1 rekrutiert und so die Teilung von Mitochondrien und Peroxisomen fördert, wodurch Morphologie und Verteilung dieser Organellen geformt werden. Über die Kontrolle des Gleichgewichts zwischen Spaltung und Fusion beeinflusst MFF die Architektur des mitochondrialen Netzwerks, die Mitophagie, die Apoptose-Empfindlichkeit und die zelluläre Bioenergetik, mit nachgelagerten Effekten auf die oxidative Phosphorylierung, den Umgang mit ROS und die Stresssignalgebung. Störungen der MFF-abhängigen Spaltung stehen mit veränderter mitochondrialer Dynamik in Zusammenhang und wurden mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen sowie mit breiteren metabolischen Dysfunktionen assoziiert, bei denen die Qualitätskontrolle der Organellen beeinträchtigt ist. Als zentraler Knotenpunkt in Signalwegen der mitochondrialen Dynamik wird MFF häufig im Kontext der Organellenhomöostase, der angeborenen Immun-Signalgebung und von Zellschicksalsentscheidungen untersucht.

Das MFF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MFF-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MFF-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MFF nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MFF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MFF-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MFF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MFF-Exone abzielen, die für die MFF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MFF-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MFF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MFF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MFF-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MFF HDR-Plasmid (h) und MFF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MFF-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MFF-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.