Plasmide CRISPR/Cas9 KO METT10D (h): sc-408605

Présentation

METTL16 (METT10D) humain code une méthyltransférase d’ARN dépendante de la S-adénosyl-L-méthionine, qui dépose la N6‑méthyladénosine (m6A) sur des substrats d’ARN structurés, reliant ainsi la modification de l’ARN au contrôle du métabolisme de l’ARN. La méthylation médiée par METTL16 peut influencer l’épissage des pré‑ARNm, la stabilité des ARN et la traduction, via des effets sur la structure de l’ARN et l’assemblage des ribonucléoprotéines, et elle a été associée à la régulation de l’homéostasie cellulaire des donneurs de méthyle via le traitement du transcrit MAT2A. Par ces fonctions, METTL16 participe à des programmes d’expression génique qui façonnent la croissance cellulaire et l’adaptation au stress, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la régulation épitranscriptomique dans des contextes de développement et de maladie. Des altérations de l’activité de METTL16 ont été impliquées dans une dérégulation du traitement des ARN et des phénotypes de signalisation proliférative observés dans plusieurs modèles de recherche en cancérologie et en neurobiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO METT10D (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène METTL16 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du METTL16, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert METTL16 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine METT10D.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en METTL16 pour l'étude de la signalisation de METT10D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de METTL16 essentiels à la fonction de METT10D
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de METTL16 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le METT10D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le METT10D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus METTL16. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le METT10D plasmide HDR (h) et le METT10D (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie METTL16 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles METTL16 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.