Plasmide CRISPR d'Activation (m) MerTK: sc-421631-ACT

Le gène murin *Mertk* code MerTK, un récepteur tyrosine kinase de la famille TAM qui reconnaît la phosphatidylsérine à la surface des cellules apoptotiques via des ligands tels que GAS6 et PROS1, favorisant l’efferocytose et la résolution anti-inflammatoire de la réponse immunitaire. La signalisation de MerTK mobilise des programmes dépendants de PI3K–AKT, de MAPK/ERK et des STAT afin de coordonner la survie des macrophages et des microglies, la modulation des cytokines et l’homéostasie tissulaire. Dans la rétine et le système nerveux central, MerTK soutient l’élimination des débris cellulaires et le maintien d’états immunitaires au voisinage des barrières, ce qui relie sa dérégulation à une phagocytose défectueuse, à une inflammation chronique et à des phénotypes pertinents pour la neurodégénérescence. Une activité anormale de la voie MerTK est également étudiée dans les macrophages associés aux tumeurs et l’immunosuppression au sein du microenvironnement tumoral, faisant de *Mertk* un nœud utile pour disséquer la signalisation de l’immunité innée et la biologie des phagocytes dans des modèles murins.

MerTK Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mertk sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MerTK Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mertk dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mertk, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MerTK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mertk natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MerTK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MerTK dans les cellules tumorales présentant une expression de Mertk silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.