Plasmide CRISPR/Cas9 KO MEK Kinase 1 (h2): sc-401107-KO-2

Présentation

MAP3K1 code la MEK kinase 1 (MEKK1), une MAP kinase kinase kinase (MAP3K) sérine/thréonine qui agit comme régulateur en amont de la signalisation MAPK activée par le stress. MEKK1 intègre des signaux provenant des cytokines, des récepteurs de facteurs de croissance et de perturbations du cytosquelette pour déclencher des cascades de phosphorylation menant à l’activation de JNK et de p38, modulant ainsi des programmes transcriptionnels qui contrôlent l’apoptose, la différenciation et les réponses inflammatoires. La protéine interagit également avec des voies de signalisation dépendantes de l’ubiquitine et liées à NF-κB, reliant des complexes proximaux aux récepteurs à l’expression génique en aval. Une dérégulation de la signalisation MAP3K1 a été associée à des décisions de destin cellulaire altérées et à des réseaux de réponse au stress aberrants impliqués dans des contextes oncogéniques et développementaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MEK Kinase 1 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAP3K1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAP3K1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAP3K1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MEK Kinase 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAP3K1 pour l'étude de la signalisation de MEK Kinase 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAP3K1 essentiels à la fonction de MEK Kinase 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAP3K1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MEK Kinase 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MEK Kinase 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAP3K1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MEK Kinase 1 plasmide HDR (h) et le MEK Kinase 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAP3K1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAP3K1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.