Plásmido Doble Nickase (h) MEK-5: sc-401688-NIC

MAP2K5 codifica MEK-5, una quinasa quinasa de MAP (MAPKK) de doble especificidad que fosforila y activa de forma preferente a ERK5 (MAPK7) para regular programas transcripcionales vinculados con la proliferación, la diferenciación, la adaptación al estrés y la remodelación del citoesqueleto. La señalización MEK-5–ERK5 integra señales procedentes de factores de crecimiento y de estímulos ambientales e influye en efectores downstream como los reguladores transcripcionales de la familia MEF2, modulando respuestas de supervivencia y motilidad celular. La desregulación del eje MAP2K5/ERK5 se ha asociado con una transducción de señales alterada en contextos que incluyen la reconfiguración de vías oncogénicas, la biología cardiovascular y la señalización inflamatoria, lo que convierte a MAP2K5 en un nodo útil para analizar el crosstalk entre vías. En modelos celulares humanos, la perturbación de la actividad de MEK-5 permite estudios mecanísticos sobre la especificidad de la red de MAPK y la señalización compensatoria entre cascadas MAPK paralelas.

MEK-5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MAP2K5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MAP2K5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MAP2K5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MAP2K5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.