Plásmido Doble Nickase (h) MEF-2D: sc-403475-NIC

MEF2D codifica el factor de transcripción humano MEF-2D, una proteína de unión al ADN de la familia MADS-box/MEF2 que integra la señalización dependiente de calcio con programas de expresión génica específicos del contexto. MEF-2D regula la diferenciación y la transcripción adaptativa en múltiples linajes, incluidos estados miogénicos y neuronales, al cooperar con cofactores como las HDAC de clase IIa y responder a las vías de MAPK y calcineurina. A través de estas interacciones sensibles a la señalización, MEF-2D ayuda a coordinar el estado de la cromatina y las salidas transcripcionales que moldean el control del ciclo celular, la supervivencia y la identidad de linaje. La actividad desregulada de MEF2D y las redes transcripcionales impulsadas por MEF2D alteradas se han implicado en la reprogramación transcripcional asociada al cáncer y en la genética de las neoplasias hematológicas, lo que respalda su uso como un nodo funcional en estudios de vías y mecanismos de enfermedad.

MEF-2D El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MEF2D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MEF2D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MEF2D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MEF2D alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.