Med28 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407371-ACT

Das humane Gen **MED28** kodiert **Med28**, eine Untereinheit des Mediator-Komplexes, die zur RNA-Polymerase-II-abhängigen Transkription beiträgt und signalabhängige Genexpressionsprogramme koordiniert. Med28 wird mit der Regulation von Zelladhäsion und Zytoskelettdynamik in Verbindung gebracht – über Interaktionen, die die transkriptionelle Kontrolle mit Signalwegen wie **MAPK/ERK** und integrinassoziierter Signalübertragung verknüpfen. Veränderte **MED28**-Expression wurde in mehreren krebsbezogenen Datensätzen beschrieben und im Hinblick auf Proliferation, Migration und stressadaptive Transkriptionszustände untersucht. Als transkriptioneller Ko-Regulator bietet Med28 einen hilfreichen Ansatzpunkt, um die Mediator-abhängige Kontrolle von Gennetzwerken in Entwicklungs- und Krankheitsmodellen zu analysieren.

Med28 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MED28-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Med28 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MED28-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MED28-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Med28-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MED28-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Med28-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Med28-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MED28-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.