Plásmido CRISPR de Activación (m) MDR1/ABCB1: sc-422215-ACT

El gen murino **Abcb1b** codifica el transportador de resistencia a múltiples fármacos **MDR1/ABCB1**, una bomba de eflujo de la familia de transportadores ABC (ATP-binding cassette) que limita la acumulación intracelular de xenobióticos y metabolitos estructuralmente diversos. Al acoplar la hidrólisis de ATP a la exportación de sustratos, MDR1 influye en las barreras farmacocinéticas y en los programas celulares de desintoxicación, modulando procesos como el transporte epitelial, la función de las barreras sangre–tejido y las respuestas al estrés frente a agresiones tóxicas. Su actividad se entrecruza con la señalización inflamatoria y metabólica mediante la regulación de la exposición intracelular a lípidos señalizadores y sustancias químicas ambientales, y se estudia con frecuencia en el contexto de la disposición de fármacos y los fenotipos de resistencia a múltiples fármacos. La expresión desregulada de MDR1/ABCB1 es relevante para modelos de enfermedad refractaria al tratamiento y para estudios mecanísticos de la biodisponibilidad mediada por transportadores *in vivo*.

MDR1/ABCB1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Abcb1b sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MDR1/ABCB1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Abcb1b en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Abcb1b, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MDR1/ABCB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Abcb1b y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MDR1/ABCB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MDR1/ABCB1 en células tumorales con expresión de Abcb1b silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.