Plasmide Double Nickase (h) MDHC: sc-416827-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MDHC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MDHC Double Nickase (h) et le plasmide MDHC Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MDH1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MDHC Antibody (H-6): sc-166879
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MDHC | sc-416827-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MDHC | sc-416827-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MDH1 code la malate déshydrogénase cytosolique (MDHC), une enzyme dépendante du NAD+/NADH qui interconvertit le malate et l’oxaloacétate, reliant le flux de carbone issu de la glycolyse au cycle de l’acide tricarboxylique via la navette malate–aspartate. En contribuant à l’équilibre rédox cytosolique et au transfert du NADH vers les mitochondries, la MDHC participe à la coordination du métabolisme énergétique, de l’anaplérose et de la disponibilité de précurseurs pour les biosynthèses. L’activité de MDH1 est étroitement liée aux réponses cellulaires à l’état nutritionnel et au stress oxydant, via la régulation des rapports NADH/NAD+ cytosoliques. Des modifications de l’expression de MDH1 ou une reprogrammation métabolique impliquant le cycle malate/oxaloacétate ont été observées dans des contextes de maladies métaboliques et prolifératives, ce qui motive des études mécanistiques dans des modèles de cellules humaines.
MDHC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MDH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MDH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MDH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MDH1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.