MDC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405652-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MDC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MDC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und MDC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MDC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MDC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405652-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MDC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405652-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mediator of DNA-Damage-Checkpoint 1 (MDC1) ist ein chromatinassoziiertes Scaffold-Protein, das die Signalweiterleitung bei DNA-Doppelstrangbrüchen verstärkt, indem es an phosphoryliertes H2AX (γH2AX) bindet und die Rekrutierung von Reparatur- und Checkpoint-Faktoren koordiniert. Über Interaktionen mit ATM-abhängigen Phosphorylierungsereignissen und Ubiquitin-Signalmodulen unterstützt MDC1 den Zusammenbau von Komponenten der 53BP1- und BRCA1-Wege und beeinflusst damit die Wegwahl zwischen nicht-homologer End-zu-End-Verknüpfung (NHEJ) und homologer Rekombination. Die Funktion von MDC1 ist zentral für die Kontrolle der S‑Phase- und G2/M-Checkpoints, für Antworten auf Replikationsstress und für die Aufrechterhaltung der Genomstabilität. Eine veränderte MDC1-Signalgebung wurde mit Phänotypen genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, wie sie häufig in der Krebsbiologie und anderen DNA-Reparatur-assoziierten Erkrankungen beobachtet werden.
MDC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MDC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MDC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MDC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MDC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.