Partículas Lentivirales de Activación (m) MDA5: sc-427977-LAC

El gen Ifih1 de ratón codifica la proteína 5 asociada a la diferenciación del melanoma (MDA5), una helicasa de ARN citosólica de la familia DExD/H-box que detecta ARN de doble cadena largo generado durante la replicación viral. Tras unirse al ARN, MDA5 señaliza a través de MAVS para activar TBK1/IKKε y, aguas abajo, los programas de IRF3/IRF7 y NF-κB, induciendo interferones de tipo I y genes estimulados por interferón. Esta vía modela la inmunidad antiviral innata, se interrelaciona con la autofagia y con respuestas asociadas al inflamasoma, e influye en la presentación de antígenos y en el tono inflamatorio. La señalización desregulada de MDA5 se ha implicado en firmas de interferón aberrantes y patología mediada por el sistema inmunitario, lo que convierte a Ifih1 en un nodo útil para desentrañar la activación de la inmunidad innata y fenotipos relevantes para la inflamación en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral MDA5 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Ifih1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MDA5 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Ifih1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MDA5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Ifih1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.