MCT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400363-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MCT1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MCT1 Double-Nickase-Plasmid (h) und MCT1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC16A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MCT1: sc-365501
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MCT1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400363-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCT1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400363-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC16A1 kodiert den Monocarboxylat-Transporter 1 (MCT1), einen protonengekoppelten Symporter der Plasmamembran, der den bidirektionalen Transport von Laktat, Pyruvat und Ketonkörpern über die Zellmembran vermittelt. Durch die Kopplung des Monocarboxylat-Transports an Protonengradienten reguliert MCT1 den intrazellulären pH-Wert, das Redoxgleichgewicht und die metabolische Kommunikation zwischen glykolytischen und oxidativen Zellen und beeinflusst dabei Signal- und Stoffwechselwege wie Glykolyse, oxidative Phosphorylierung und hypoxieassoziierte metabolische Anpassung. Die Funktion von MCT1 ist in chaperonabhängige Prozesse des Transports zur Membran und der Stabilisierung dort (z. B. CD147/BSG) eingebunden, was die Substratverfügbarkeit und Signalübertragung in metabolisch aktiven Geweben beeinflusst. Eine veränderte Expression oder Aktivität von SLC16A1 wurde mit einer gestörten Laktatverwertung und Energiemetabolik in der Krebsbiologie, der Skelettmuskelphysiologie und in neurologischen Kontexten in Verbindung gebracht, was es zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zur metabolischen Reprogrammierung macht.
MCT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC16A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC16A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC16A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC16A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.