MCPIP CRISPR Activation Plasmid (m): sc-432978-ACT

Das murine Gen **Zc3h12a** kodiert **MCPIP** (auch bekannt als **Regnase-1**), eine RNase und Deubiquitinase, die die Expression entzündungsrelevanter Gene begrenzt, indem sie den Abbau von Zytokin- und Chemokin-mRNAs fördert. MCPIP wirkt an der Schnittstelle der angeborenen Immun-Signalgebung, reguliert die Outputs der **NF-κB**- und **MAPK**-Signalwege und prägt die Aktivierungszustände von Makrophagen und T-Zellen. Indem **Zc3h12a** Ausmaß und Dauer von Immunantworten begrenzt, beeinflusst es die inflammatorische Homöostase und wurde in Modellen von Autoimmunität, Gewebeentzündung und immunvermittelter Pathologie beschrieben. Seine RNA-Bindungs- und Ubiquitin-Editieraktivitäten verknüpfen zudem posttranskriptionelle Kontrolle mit Stress- und Differenzierungsprogrammen, die für Forschung in Immunologie und Krebsbiologie relevant sind.

MCPIP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Zc3h12a-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MCPIP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Zc3h12a-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Zc3h12a-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MCPIP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Zc3h12a-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MCPIP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MCPIP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Zc3h12a-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.