Plasmide CRISPR d'Activation (m) Mcl-1: sc-421589-ACT

Le gène murin **Mcl1** code **Mcl-1**, une protéine anti-apoptotique de la famille **BCL-2** qui préserve l’intégrité de la membrane externe mitochondriale en séquestrant des facteurs **BH3-only** pro-apoptotiques et en freinant l’activation de **BAX/BAK**. Son abondance est étroitement régulée par la signalisation des facteurs de croissance, les réponses au stress et le renouvellement via le protéasome, ce qui fait de Mcl-1 un nœud de réponse rapide dans l’apoptose intrinsèque. Mcl-1 interagit également avec des programmes cellulaires tels que le métabolisme mitochondrial, la progression du cycle cellulaire et la survie en aval de voies comme **PI3K–AKT** et **MAPK/ERK**. Une expression dérégulée de **Mcl1** est fréquemment associée à une modification des seuils apoptotiques, contribuant à une survie cellulaire aberrante en cancérologie ainsi qu’à des phénotypes de survie dans les lignées immunitaires et hématopoïétiques, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques de l’adaptation au stress et du destin cellulaire.

Mcl-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mcl1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mcl-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mcl1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mcl1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mcl-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mcl1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mcl-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mcl-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mcl1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.