MC1-R Double Nickase Plasmid (m): sc-421583-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MC1-R Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MC1-R Double-Nickase-Plasmid (m) und MC1-R Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mc1r abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MC1-R Double Nickase Plasmid (m) | sc-421583-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MC1-R Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421583-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Mc1r** kodiert den Melanocortin-1-Rezeptor (MC1-R), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der die Differenzierung von Melanozyten und den Pigmentwechsel als Reaktion auf Melanocortin-Liganden wie **α‑MSH** reguliert. MC1-R signalisiert überwiegend über **Gαs**-getriebene **cAMP/PKA**-Signalwege und beeinflusst dadurch **MITF**-abhängige Transkriptionsprogramme, die Melaninsynthese sowie zelluläre Antworten auf UV‑induzierten Stress. Genetische Variation oder veränderte Expression von MC1-R wird bei Mäusen mit Veränderungen der Fellfarbe und Pigmentierungsphänotypen in Verbindung gebracht und ist allgemein relevant für Studien zur Melanozytenbiologie und zu pigmentassoziiertem oxidativem Stress. Als Knotenpunkt, der Melanocortin-Signalgebung mit der transkriptionellen Kontrolle der Melanogenese verknüpft, stellt MC1-R ein gut handhabbares Ziel dar, um GPCR-Signalwege in Pigmentzellen zu untersuchen.
MC1-R Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mc1r-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mc1r abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mc1r-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mc1r-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.