MC1-R Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402152

Descripción general

MC1R codifica el receptor de melanocortina 1 (MC1-R), un receptor acoplado a proteína G que se expresa predominantemente en los melanocitos y se acopla a Gαs para estimular la adenilato ciclasa y elevar los niveles de AMPc. La señalización activada de MC1-R promueve la síntesis de eumelanina y apoya los programas de pigmentación mediante reguladores aguas abajo como MITF, a la vez que se interconecta con respuestas celulares al estrés, incluidas las vías de daño oxidativo e inducido por UV. La variación o desregulación de MC1R se asocia con fenotipos de pigmentación alterados y se ha estudiado ampliamente por su relación con la susceptibilidad al melanoma y otras patologías cutáneas vinculadas a la radiación UV. Más allá de la pigmentación, la señalización de MC1-R también se investiga en inflamación y en la biología de la red de melanocortinas, proporcionando un punto de entrada mecanístico para el estudio de la señalización del receptor y de las vías de los GPCR.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MC1-R (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MC1R en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MC1R junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MC1R tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MC1-R.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MC1R para la investigación de la señalización de MC1-R, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MC1R críticos para la función de MC1-R
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MC1R para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MC1-R CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MC1-R CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MC1R. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MC1-R (h) y el plásmido HDR MC1-R (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MC1R para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MC1R definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.