MC1-R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402152

Panoramica

MC1R codifica il recettore della melanocortina 1 (MC1-R), un recettore accoppiato a proteine G espresso prevalentemente nei melanociti, che si accoppia a Gαs per stimolare l’adenilato ciclasi e aumentare i livelli di cAMP. L’attivazione della segnalazione di MC1-R promuove la sintesi di eumelanina e sostiene i programmi di pigmentazione tramite regolatori a valle come MITF, intersecandosi al contempo con le risposte cellulari allo stress, incluse le vie del danno ossidativo e indotto dai raggi UV. Le varianti o la disregolazione di MC1R sono associate a fenotipi di pigmentazione alterati e sono state ampiamente studiate per la loro correlazione con la suscettibilità al melanoma e ad altre patologie cutanee legate all’esposizione ai raggi UV. Oltre alla pigmentazione, la segnalazione di MC1-R è oggetto di studio anche nell’infiammazione e nella biologia della rete delle melanocortine, offrendo un punto di accesso meccanicistico per la ricerca sulla segnalazione recettoriale e sulle vie dei GPCR.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MC1-R (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MC1R in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MC1R insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MC1R a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MC1-R.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MC1R per lo studio della segnalazione di MC1-R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MC1R critici per la funzione di MC1-R
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MC1R per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MC1-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MC1-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MC1R. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MC1-R Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MC1-R (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MC1R per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MC1R definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.