Plasmide CRISPR d'Activation (h) MBOAT5: sc-403597-ACT

LPCAT3 (également connu sous le nom de MBOAT5) code une O‑acyltransférase membranaire qui remodèle les phospholipides via le cycle de Lands, en catalysant le transfert de chaînes acyles vers la lysophosphatidylcholine afin de contribuer au maintien de la composition membranaire et de la disponibilité des lipides de signalisation. En modulant les pools de phospholipides polyinsaturés, MBOAT5 influence des processus dépendants des membranes, notamment le trafic vésiculaire, la signalisation des récepteurs et les réponses au stress oxydatif liées à la sensibilité à la peroxydation lipidique. Des altérations du remodelage des phospholipides ont été associées à des phénotypes métaboliques et inflammatoires, faisant de MBOAT5 un nœud pertinent pour l’étude de l’homéostasie lipidique et des programmes d’adaptation au stress. L’exploration fonctionnelle de cette voie est couramment appliquée à des modèles de dysfonctionnement hépatique et cardiométabolique, d’activation immunitaire et de transitions d’état cellulaire induites par les lipides.

MBOAT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LPCAT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MBOAT5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LPCAT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LPCAT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MBOAT5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LPCAT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MBOAT5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MBOAT5 dans les cellules tumorales présentant une expression de LPCAT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.