Partículas Lentivirales de Activación (m) MBNL1: sc-425296-LAC

Mbnl1 codifica el regulador de empalme tipo muscleblind 1 (MBNL1), una proteína de unión a ARN que reconoce motivos YGCY para controlar el empalme alternativo, la localización del ARNm y su estabilidad durante el desarrollo y el mantenimiento tisular. En el ratón, MBNL1 coordina transiciones de isoformas de empalme que influyen en la organización del citoesqueleto, la excitabilidad de la membrana y los programas de diferenciación en tejidos musculares, cardíacos y neuronales. La disrupción de la función de la familia MBNL se asocia con redes generalizadas de empalme incorrecto implicadas en la fisiopatología de la distrofia miotónica y otros trastornos del procesamiento de ARN, lo que convierte a Mbnl1 en un nodo clave para estudiar la regulación génica dependiente del empalme. El procesamiento de ARN dependiente de MBNL1 también se cruza con la remodelación del transcriptoma en respuesta al estrés y con cambios de estado celular, que pueden medirse mediante RNA-seq con resolución de isoformas y ensayos funcionales.

Las partículas de activación lentiviral MBNL1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Mbnl1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MBNL1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Mbnl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MBNL1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Mbnl1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.