MBLAC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407281-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MBLAC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MBLAC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und MBLAC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MBLAC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MBLAC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407281-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MBLAC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407281-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MBLAC1 (Metallo-β-Lactamase-Domäne enthaltend 1) kodiert eine zinkabhängige Hydrolase aus der Metallo-β-Lactamase-Superfamilie, die überwiegend mit dem mitochondrialen Stoffwechsel assoziiert ist. Das Protein wird mit der Verarbeitung kleiner Moleküle oder nukleotidabgeleiteter Metabolite in Verbindung gebracht und unterstützt dadurch das mitochondriale Redoxgleichgewicht sowie die allgemeine zelluläre Energiehomöostase. Über seinen Einfluss auf die mitochondriale Funktion kann MBLAC1 in Reaktionen auf oxidativen Stress und in Stoffwechsel-Anpassungswege eingreifen, die in proliferativen und stressassoziierten Zellzuständen häufig gestört sind. Veränderungen der MBLAC1-Expression oder -Aktivität wurden im Kontext metabolischer Dysregulation und mitochondrialer Phänotypen mit Relevanz für die Krankheitsbiologie untersucht, was MBLAC1 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien macht.
MBLAC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MBLAC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MBLAC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MBLAC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MBLAC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.