MBD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401072

Übersicht

MBD3 kodiert das Methyl-CpG-Bindungsdomänen-Protein 3, eine zentrale Komponente des NuRD-Komplexes (nucleosome remodeling and deacetylase), der ATP-abhängiges Chromatin-Remodeling mit Histon-Deacetylierung koppelt, um Transkriptionsprogramme zu regulieren. Im Gegensatz zu einigen Mitgliedern der MBD-Familie besitzt MBD3 nur eine begrenzte Affinität zu methyliertem CpG-DNA, ist jedoch essenziell, um NuRD über Protein-Protein-Interaktionen und den Chromatinkontext an spezifische genomische Loci zu rekrutieren. Über NuRD trägt MBD3 zur Kontrolle von Zellschicksalsentscheidungen, DNA-Schadensantworten und zur Aufrechterhaltung von Chromatinzuständen bei, die Proliferation und Differenzierung beeinflussen. Eine Fehlregulation der mit MBD3/NuRD verbundenen epigenetischen Kontrolle wurde mit aberranten Transkriptionsnetzwerken in Krebs sowie mit veränderter entwicklungsbezogener Genregulation in Verbindung gebracht, was für Studien zur Neuroentwicklung und Stammzellbiologie relevant ist.

Das MBD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MBD3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MBD3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MBD3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MBD3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MBD3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MBD3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MBD3-Exone abzielen, die für die MBD3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MBD3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MBD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MBD3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MBD3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MBD3 HDR-Plasmid (h) und MBD3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MBD3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MBD3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.