MaxiKβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403096

Panoramica

KCNMB1 codifica la subunità regolatoria β1 dei canali del potassio a grande conduttanza attivati da Ca²⁺ e dal voltaggio (BK/MaxiK), comunemente indicata come MaxiKβ. Aumentando la sensibilità dei canali BK al Ca²⁺ e modificandone la cinetica di gating, MaxiKβ modella l’eccitabilità di membrana, la dinamica intracellulare del Ca²⁺ e il tono della muscolatura liscia. Questa attività modulatrice si integra in vie che controllano la reattività vascolare, la contrattilità delle vie aeree e la gestione renale degli elettroliti, con effetti a valle sulla segnalazione associata a NO/cGMP e su processi dipendenti dal Ca²⁺. Alterazioni della funzione o dell’espressione di KCNMB1 sono state associate a una disregolazione del controllo della pressione arteriosa, a fenotipi di ipercontrattilità della muscolatura liscia e, più in generale, a disturbi legati all’eccitabilità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MaxiKβ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNMB1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNMB1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNMB1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MaxiKβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNMB1 per lo studio della segnalazione di MaxiKβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNMB1 critici per la funzione di MaxiKβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNMB1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MaxiKβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MaxiKβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNMB1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MaxiKβ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MaxiKβ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNMB1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNMB1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.