Particules Lentivirales d'Activation (h) MaxiKα: sc-402208-LAC

KCNMA1 code la sous-unité α formant le pore du canal potassique MaxiKα (BK) à grande conductance, activé par le calcium et le voltage. Ce canal couple les signaux intracellulaires de Ca²⁺ et la dépolarisation membranaire à l’efflux de K⁺, modulant la repolarisation du potentiel d’action, la fréquence de décharge et l’après-hyperpolarisation dans les tissus excitables. L’activité de MaxiKα s’intègre aux voies de signalisation dépendantes du Ca²⁺ et à l’homéostasie ionique pour réguler le tonus du muscle lisse, l’excitabilité neuronale et la sécrétion. Une dérégulation de la fonction ou de l’expression de KCNMA1 a été associée à des troubles impliquant des altérations de l’excitabilité et de la contractilité, notamment des phénotypes neurodéveloppementaux, une susceptibilité aux crises et des dysfonctions du muscle lisse vasculaire ou des voies aériennes, ce qui étaye des études mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents.

Les particules d'activation lentivirales MaxiKα (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de KCNMA1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MaxiKα (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription KCNMA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MaxiKα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif KCNMA1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.