Plásmido CRISPR de Activación (h) MATE2: sc-404811-ACT

El gen humano SLC47A2 codifica el transportador de extrusión de fármacos y toxinas MATE2 (SLC47A2), un antiportador electroneutro de catión orgánico/H+ que media el eflujo de metabolitos endógenos y cationes xenobióticos a través de membranas epiteliales. MATE2 se asocia de forma destacada con el transporte en el túbulo proximal renal, donde actúa en conjunto con transportadores de captación como OCT2 para coordinar la secreción vectorial de cationes orgánicos y modular la exposición celular a compuestos cargados. Al controlar la acumulación intracelular de sustratos catiónicos, SLC47A2 influye en la variabilidad farmacocinética, las interacciones transportador–transportador y las respuestas al estrés asociadas a una capacidad de transporte epitelial alterada. Por ello, la expresión desregulada o la variación funcional de SLC47A2 es relevante para estudios de fisiología renal, vías de disposición de fármacos y susceptibilidad asociada a transportadores a fenotipos de lesión renal en modelos experimentales.

MATE2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC47A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MATE2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC47A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC47A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MATE2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC47A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MATE2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MATE2 en células tumorales con expresión de SLC47A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.