Plásmido CRISPR de Activación (h) Maspin: sc-416693-ACT

El SERPINB5 humano codifica maspina, un miembro no inhibidor de la familia de las serpinas implicado en la regulación de la adhesión y la motilidad de las células epiteliales, así como de las interacciones con la matriz extracelular. Se ha relacionado a la maspina con la modulación de la activación del plasminógeno, la señalización célula–matriz y la dinámica del citoesqueleto, influyendo en procesos como la invasión, la migración y la remodelación tisular. Su expresión y su localización subcelular se alteran con frecuencia en distintos tipos de tumores, donde la maspina se estudia como un regulador dependiente del contexto de la progresión tumoral y de fenotipos asociados a la metástasis. En consecuencia, SERPINB5 se utiliza ampliamente para investigar vías que conectan la diferenciación epitelial, las respuestas al estrés y las señales del microambiente en biología del cáncer.

Maspin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SERPINB5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Maspin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SERPINB5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SERPINB5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Maspin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SERPINB5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Maspin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Maspin en células tumorales con expresión de SERPINB5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.