MARCKSL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403985-ACT

MARCKSL1（MARCKS-like 1）は、アクチン結合性で膜に関連するタンパク質をコードしており、リン酸化依存的にリン脂質およびF-アクチンと相互作用することで、細胞骨格の再構築、細胞極性、運動性を制御します。PKCシグナル伝達の下流エフェクターとして、MARCKSL1は神経突起伸長、ラメリポディアの動態、小胞輸送を協調させる経路に関与し、細胞外の刺激を細胞形態の変化へと結び付けます。MARCKSL1の発現変動は、複数の腫瘍で浸潤性形質や転移進展と関連することが報告されており、遊走や接着における役割と整合的です。これらの特性により、MARCKSL1は発生、創傷様応答、がん細胞の播種に関わる細胞骨格駆動型メカニズムを研究するうえで有用な標的となります。

MARCKSL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MARCKSL1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MARCKSL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MARCKSL1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMARCKSL1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MARCKSL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMARCKSL1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMARCKSL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMARCKSL1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMARCKSL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。