MARCH1 Double Nickase Plasmid (m): sc-428465-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MARCH1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MARCH1 Double-Nickase-Plasmid (m) und MARCH1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf March1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MARCH1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-428465-NIC | 20 µg | $410.00 |
Maus-MARCH1 (membrane associated ring-CH-type finger 1) kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase, die in endosomalen und Plasmamembran-Kompartimenten lokalisiert ist und die Immun-Signalübertragung reguliert, indem sie die Ubiquitinierung und den Transport wichtiger Oberflächenproteine steuert. MARCH1 fördert die Internalisierung und den Abbau von Antigenpräsentationsmolekülen wie MHC-Klasse II sowie des kostimulatorischen Moleküls CD86 und prägt dadurch die Aktivierung von dendritischen Zellen und B-Zellen, die periphere Toleranz und entzündliche Antworten. Über ubiquitinabhängige Sortierung und lysosomalen Abbau verknüpft MARCH1 die Homöostase von Membranproteinen mit Signalwegen, die Endozytose, vesikulären Transport und die adaptive Immunität steuern. Eine dysregulierte MARCH1-Aktivität wurde mit veränderter Antigenpräsentation und gestörter Immunhomöostase in Verbindung gebracht, was ihre Untersuchung in Modellen für Autoimmunität, Infektionen und Tumor–Immun-Interaktionen unterstützt.
MARCH1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des March1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von March1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die March1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit March1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.