MAP-1B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400981-ACT

Human MAP1B kodiert das mikrotubuliassoziierte Protein 1B (MAP-1B), einen Regulator des Zytoskeletts, der an Mikrotubuli bindet und während der neuronalen Entwicklung deren Stabilisierung sowie dynamischen Umbau fördert. MAP-1B unterstützt Axonwachstum, die Steuerung des Wachstumskegels und die Neuritenausbildung, indem es das Zusammenspiel von Mikrotubuli und Aktin sowie für die polarisierte Zellarchitektur erforderliche intrazelluläre Transportprozesse koordiniert. Seine Aktivität überschneidet sich mit Signalprogrammen, die die Organisation des Zytoskeletts modulieren, darunter Signalwege, die Neuritogenese und synaptische Reifung steuern. Eine veränderte MAP1B-Expression oder -Regulation wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und krankheitsrelevanten zellulären Funktionsstörungen im Nervensystem in Verbindung gebracht, was MAP1B zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der neuronalen Struktur und Konnektivität macht.

MAP-1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAP1B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MAP-1B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAP1B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAP1B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MAP-1B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAP1B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MAP-1B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MAP-1B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAP1B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.