Particules Lentivirales d'Activation (h) MANEAL: sc-414652-LAC

La protéine humaine MANEAL (mannosidase alpha class 1A member 2-like) est codée par un gène qui produit une protéine associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans la maturation des glycoprotéines et le contrôle qualité au sein de la voie sécrétoire précoce. En participant à des processus liés au traitement des N‑glycanes et à l’homéostasie du RE, MANEAL est susceptible d’influencer le trafic et la stabilité des protéines membranaires et sécrétées nouvellement synthétisées. Les perturbations des voies de contrôle qualité des glycoprotéines dans le RE sont largement pertinentes pour les réponses cellulaires au stress, les déséquilibres de la protéostasie et l’altération des signaux intracellulaires, pouvant contribuer à des phénotypes associés à des maladies dans de nombreux tissus. Ainsi, MANEAL présente un intérêt pour des études mécanistiques reliant le traitement des protéines dépendant des glycannes au remodelage de voies de signalisation dans des conditions de stress ou de différenciation.

Les particules d'activation lentivirales MANEAL (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MANEAL dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MANEAL (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MANEAL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MANEAL. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MANEAL ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.