Partículas Lentivirales de Activación (h) MANEA: sc-413213-LAC

El gen humano **MANEA** codifica la endo-α-manosidasa, una glicosidasa localizada en el aparato de Golgi que permite una vía alternativa de maduración de las glucoproteínas N‑ligadas al recortar N‑glicanos de alto contenido en manosa glucosilados. Esta actividad se integra con el control de calidad del retículo endoplásmico (RE) y con el procesamiento posterior en la vía secretora al coordinar la remodelación de los glicanos, lo que influye en el plegamiento, el tráfico y la estabilidad de las proteínas. A través de su papel en la homeostasis de las glucoproteínas, MANEA afecta las redes celulares de proteostasis y puede modular el manejo de receptores y enzimas glicosilados. Las alteraciones en las vías de N‑glicosilación se han relacionado con trastornos congénitos de la glicosilación y con fenotipos más amplios relevantes para enfermedades que implican mal plegamiento proteico y respuestas al estrés, lo que convierte a MANEA en un nodo útil para estudios mecanísticos.

Las partículas de activación lentiviral MANEA (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MANEA en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MANEA (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MANEA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MANEA. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MANEA y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.