Plasmide CRISPR/Cas9 KO MALT1 (m): sc-433761

Présentation

Malt1 (MALT1) est une paracaspase et une protéine échafaudage essentielle à la signalisation induite par les récepteurs de l’antigène dans les lymphocytes. Elle agit au sein du complexe CARD11–BCL10–MALT1 (CBM) pour coupler l’engagement du récepteur à l’activation des voies NF-κB et MAPK. Grâce au clivage, dépendant de son activité protéase, de multiples régulateurs de signalisation, ainsi qu’à sa fonction d’échafaudage indépendante de l’activité protéase, MALT1 contribue à ajuster les programmes transcriptionnels qui contrôlent l’activation, la prolifération et la production de cytokines des cellules immunitaires. Dans des modèles murins, une activité de Malt1 altérée perturbe l’homéostasie immunitaire et est largement utilisée pour étudier les mécanismes à l’origine de l’inflammation, de la différenciation lymphocytaire et des pathologies d’origine immunitaire. La connectivité de sa voie de signalisation fait également de Malt1 un nœud clé pour analyser le remodelage des réseaux de signalisation dans des contextes hématopoïétiques et immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MALT1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Malt1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Malt1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Malt1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MALT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Malt1 pour l'étude de la signalisation de MALT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Malt1 essentiels à la fonction de MALT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Malt1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MALT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MALT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Malt1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MALT1 plasmide HDR (m) et le MALT1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Malt1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Malt1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.