Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MAL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403024
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MAL El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MAL, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MAL Anticuerpo (E-1): sc-390687
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MAL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403024 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
MAL (proteína de mielina y linfocitos) es una proteína hidrofóbica de membrana con cuatro dominios transmembrana, enriquecida en microdominios de membrana ricos en glucolípidos y colesterol, donde contribuye al tráfico hacia la membrana apical y a la estabilización de la arquitectura epitelial polarizada. Participa en procesos de clasificación y transporte vesicular que influyen en la organización de las uniones célula–célula y en la distribución de proteínas de membrana. La expresión de MAL se utiliza con frecuencia como marcador del estado de diferenciación en linajes epiteliales y se ha asociado con una dinámica de membrana alterada en múltiples contextos de cáncer, incluidos informes de silenciamiento epigenético o de expresión desregulada vinculados a la progresión tumoral y a la señalización relacionada con el sistema inmunitario. Estas propiedades convierten a MAL en una diana útil para estudiar la compartimentalización de membranas, el transporte polarizado y fenotipos relacionados con la plasticidad epitelial.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MAL (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MAL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MAL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MAL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MAL.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MAL para la investigación de la señalización de MAL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MAL críticos para la función de MAL
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MAL para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MAL CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MAL CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MAL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MAL (h) y el plásmido HDR MAL (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MAL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MAL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.