MAGE-C2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405516

Panoramica

MAGEC2 codifica l’antigene associato al melanoma C2 (MAGE‑C2), un antigene cancro‑testicolo con espressione limitata ai normali tessuti della linea germinale e frequente ri-espressione in tumori diversi. MAGE‑C2 partecipa all’omeostasi proteica intervenendo in processi dipendenti dall’ubiquitina, inclusa la modulazione dell’attività delle ligasi E3 tramite interazioni con partner contenenti domini RING, influenzando così la stabilità di regolatori della segnalazione e del ciclo cellulare. L’espressione deregolata di MAGE‑C2 è stata associata ad alterazioni della proliferazione, delle risposte allo stress e di programmi trascrizionali legati alla progressione maligna e al riconoscimento immunitario. In quanto antigene associato al tumore, è ampiamente studiato nei contesti della presentazione dell’antigene e come correlato molecolare del fenotipo tumorale e del rimodellamento delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGE-C2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAGEC2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAGEC2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAGEC2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAGE-C2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAGEC2 per lo studio della segnalazione di MAGE-C2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MAGEC2 critici per la funzione di MAGE-C2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAGEC2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MAGE-C2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MAGE-C2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAGEC2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MAGE-C2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MAGE-C2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAGEC2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAGEC2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.