MAG Double Nickase Plasmid (h): sc-401604-NIC

Das myelinassoziierte Glykoprotein (MAG) ist ein sialinsäurebindendes, immunglobulinähnliches Zelloberflächenprotein, das in myelinisierenden Gliazellen angereichert vorkommt. Dort vermittelt es die Adhäsion zwischen Axon und Glia und stabilisiert die Interaktionen zwischen Myelin und Axon. MAG bindet an Glykankomponenten und trägt zu Signalprozessen bei, die die Organisation des Zytoskeletts, das Neuritenwachstum und die Aufrechterhaltung der axonalen Integrität während der Entwicklung des Nervensystems sowie der Homöostase im Erwachsenenalter beeinflussen. In menschlichen Zellen überschneiden sich MAG-assoziierte Prozesse mit Signalwegen, die die Myelinstruktur, den axonalen Transport und die Reaktion auf neuronale Verletzungen steuern. Eine fehlregulierte MAG-Expression oder -Signalübertragung wurde mit demyelinisierenden und neurodegenerativen pathophysiologischen Prozessen sowie mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die die axonale Regeneration begrenzen, was MAG zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in der Neurobiologie macht.

MAG Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MAG-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MAG abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MAG-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MAG-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.