MafA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401480

Descripción general

MAFA codifica el factor de transcripción MafA, una proteína con cremallera de leucina básica que se une a elementos de reconocimiento MAF para regular programas de expresión génica implicados en la diferenciación celular y en la transcripción sensible a estímulos. En la biología de los islotes pancreáticos humanos, MafA se asocia con la regulación de la transcripción del gen de la insulina y con redes más amplias que coordinan la señalización dependiente de glucosa, la función de la vía secretora y el mantenimiento de la identidad de las células endocrinas. Las alteraciones en la actividad de MAFA se han relacionado con estados desregulados de expresión génica en células beta y con una producción de insulina deficiente, lo que lo hace relevante para estudios sobre mecanismos vinculados a la diabetes y respuestas al estrés de los islotes. Más allá del páncreas, el control transcripcional dependiente de MafA sirve como modelo para investigar el uso de potenciadores específicos de tejido y la regulación metabólica de genes impulsada por factores de transcripción.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MafA (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MAFA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MAFA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MAFA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MafA.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MAFA para la investigación de la señalización de MafA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MAFA críticos para la función de MafA
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MAFA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MafA CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MafA CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MAFA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MafA (h) y el plásmido HDR MafA (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MAFA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MAFA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.