Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAdCAM-1: sc-403616-ACT

MADCAM1 code pour la mucosal addressin cell adhesion molecule 1 (MAdCAM-1), une glycoprotéine endothéliale qui assure le recrutement sélectif et la rétention des lymphocytes circulants au sein des tissus muqueux. En se liant à l’intégrine α4β7 des lymphocytes, MAdCAM-1 favorise l’adhésion et la transmigration à travers des veinules spécialisées et contribue à l’organisation des structures lymphoïdes associées à l’intestin. Son expression est régulée par la signalisation des cytokines inflammatoires et s’inscrit dans des programmes d’activation endothéliale qui coordonnent le trafic leucocytaire et la surveillance immunitaire locale. Une activité dérégulée de MAdCAM-1 a été associée à une inflammation muqueuse chronique et à des atteintes à médiation immunitaire, ce qui en fait un marqueur utile et un nœud mécanistique pour l’étude du remodelage tissulaire induit par l’inflammation.

MAdCAM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MADCAM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAdCAM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MADCAM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MADCAM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAdCAM-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MADCAM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAdCAM-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAdCAM-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MADCAM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.