mAChR M2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402394
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- mAChR M2 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im mAChR M2-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: mAChR M2: sc-33712
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
mAChR M2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-402394 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CHRM2 kodiert den M2-Subtyp des muskarinischen Acetylcholinrezeptors (mAChR M2), einen Gi/o-gekoppelten GPCR, der die Adenylylcyclase-Aktivität dämpft und dadurch intrazelluläres cAMP sowie die nachgeschaltete PKA-Signalübertragung reduziert. mAChR M2 moduliert außerdem die Leitfähigkeit von Ionenkanälen und beeinflusst damit die Membranerregbarkeit und die Neurotransmitterfreisetzung in neuronalen Schaltkreisen; zudem reguliert er chronotrope und inotrope Antworten in Kardiomyozyten. Über diese Mechanismen ist CHRM2 an cholinerger Neurotransmission, autonomer Kontrolle und umfassenderen, GPCR-abhängigen Signalnetzwerken beteiligt. Eine fehlregulierte muskarinische Signalübertragung wurde in Forschungszusammenhängen mit Phänotypen der kardialen Elektrophysiologie sowie mit neuropsychiatrischen und kognitiven Prozessen in Verbindung gebracht, wodurch CHRM2 einen nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Signalwegen darstellt.
Das mAChR M2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CHRM2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CHRM2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CHRM2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die mAChR M2-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CHRM2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der mAChR M2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CHRM2-Exone abzielen, die für die mAChR M2-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CHRM2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom mAChR M2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom mAChR M2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CHRM2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das mAChR M2 HDR-Plasmid (h) und mAChR M2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CHRM2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CHRM2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.