LysRS Double Nickase Plasmid (h): sc-404110-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LysRS Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LysRS Double-Nickase-Plasmid (h) und LysRS Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KARS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LysRS: sc-271331
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LysRS Double Nickase Plasmid (h) | sc-404110-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LysRS Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404110-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KARS kodiert die humane Lysyl‑tRNA‑Synthetase (LysRS), eine Aminoacyl‑tRNA‑Synthetase der Klasse II, die Lysin an ihre cognate tRNA^Lys koppelt und so die Genauigkeit der Translation sicherstellt sowie die Proteom‑Homöostase unterstützt. Über ihre kanonische Rolle in der zytosolischen Proteinsynthese hinaus wird LysRS auch mit signalvermittelten Prozessen in Verbindung gebracht, und zwar über eine regulierte subzelluläre Lokalisation und Protein‑Protein‑Interaktionen, die die Translation mit zellulären Stressantworten verknüpfen. Störungen der Funktion von Aminoacyl‑tRNA‑Synthetasen können Proteostase, integrierte Stresssignalwege und Zellzustandsprogramme beeinflussen, die häufig in Modellen der Neuroentwicklung, Neurodegeneration und Krebsbiologie untersucht werden. Eine fehlregulierte KARS‑Aktivität oder ‑Expression ist zudem für die mitochondriale‑zytosolische Koordination der Genexpression und die metabolische Anpassung relevant, was KARS zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung translationszentrierter Mechanismen macht.
LysRS Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KARS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KARS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KARS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KARS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.