Plásmido CRISPR de Activación (h) LYRM4: sc-412759-ACT

LYRM4 humano (LYR motif containing 4), también conocido como ISD11, es una proteína de la matriz mitocondrial que actúa como cofactor esencial del complejo desulfurasa de cisteína NFS1, necesario para la biogénesis de los clústeres hierro‑azufre (Fe–S). Al estabilizar la maquinaria central de transferencia de azufre y apoyar el ensamblaje de Fe–S dependiente de andamiaje, LYRM4 ayuda a mantener la actividad de enzimas dependientes de Fe–S implicadas en la fosforilación oxidativa, la traducción mitocondrial y la homeostasis redox. La alteración o insuficiencia de esta vía puede deteriorar la función de la cadena respiratoria, aumentar el estrés oxidativo y comprometer el metabolismo energético celular, lo que vincula la disfunción mitocondrial asociada a LYRM4 con mecanismos de enfermedades neurometabólicas. En consecuencia, LYRM4 se estudia con frecuencia en el contexto del control de calidad mitocondrial, la adaptación metabólica y las relaciones genotipo‑fenotipo en defectos del ensamblaje de clústeres Fe–S.

LYRM4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LYRM4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LYRM4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LYRM4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LYRM4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LYRM4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LYRM4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LYRM4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LYRM4 en células tumorales con expresión de LYRM4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.