Plasmide Double Nickase (h) Lyn: sc-400463-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Lyn correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Lyn Double Nickase (h) et le plasmide Lyn Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LYN. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Lyn Antibody (H-6): sc-7274
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Lyn | sc-400463-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Lyn | sc-400463-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **LYN** code Lyn, une tyrosine kinase non réceptrice de la famille Src qui couple la signalisation des immunorécepteurs et des récepteurs de cytokines à des voies en aval contrôlant la prolifération, la survie, l’adhésion et le remodelage du cytosquelette. Lyn phosphoryle des protéines adaptatrices contenant des ITAM et module la signalisation au sein des réseaux du récepteur des cellules B, des récepteurs Fc et des intégrines, en interaction avec les cascades PI3K–AKT, MAPK et NF-κB. Dans les lignées hématopoïétiques, Lyn intervient aussi dans le contrôle par rétroaction des seuils d’activation via des récepteurs inhibiteurs et des phosphatases, modelant les réponses immunitaires innées et adaptatives. Une activité ou une expression dérégulée de **LYN** a été associée à une signalisation inflammatoire aberrante et à une altération des signaux de croissance dans divers contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent en immunologie et en recherche sur la biologie du cancer.
Lyn Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LYN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LYN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LYN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LYN.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.