Ly-6K CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404264-ACT

Humanes **LY6K** kodiert **Ly-6K**, ein über **Glykosylphosphatidylinositol (GPI)** verankertes Oberflächenprotein der **Ly6/uPAR-Familie**, das mit Zell‑Zell‑Signalgebung und der Organisation von Membran‑Mikrodomänen in Verbindung gebracht wird. Die Expression von Ly-6K wurde mit der Regulation des Verhaltens epithelialer Zellen verknüpft, einschließlich Migration und invasiver Phänotypen, und wird häufig im Kontext tumorassoziierter Genprogramme sowie immunbezogener Interaktionen im Mikroumfeld untersucht. Als Zelloberflächenmolekül ist Ly-6K relevant für Signalwege, die Adhäsion, Rezeptor‑Crosstalk und die Umgestaltung von Signalnetzwerken steuern, welche Proliferation und Überleben beeinflussen. Sein in vielen Normalgeweben eingeschränktes Expressionsprofil und die erhöhte Expression in mehreren Krebsarten machen **LY6K** zu einem nützlichen Marker und funktionellen Knotenpunkt für mechanistische Onkologie- und Biomarkerforschung.

Ly-6K Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LY6K-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ly-6K Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LY6K-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LY6K-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ly-6K-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LY6K-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ly-6K-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ly-6K-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LY6K-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.