Plasmide CRISPR d'Activation (m) LXR alpha/NR1H3: sc-423616-ACT

Nr1h3 code pour le récepteur X du foie alpha (LXRα/NR1H3), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui forme des hétérodimères avec RXR afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant l’efflux du cholestérol, le métabolisme des acides biliaires et la synthèse des acides gras. Dans les macrophages et les hépatocytes, LXRα coordonne la gestion des lipides via des cibles telles qu’ABCA1/ABCG1 et s’articule avec la signalisation de l’immunité innée pour moduler l’expression des gènes inflammatoires. Ces voies relient l’activité de NR1H3 à la biologie des cellules spumeuses, à l’accumulation lipidique athérogène et à l’inflammation métabolique, ce qui en fait un nœud largement utilisé pour étudier l’homéostasie lipidique dans des modèles de maladies cardiovasculaires et métaboliques. Dans les systèmes murins, la perturbation de Nr1h3 est également exploitée pour disséquer le dialogue entre la détection des stérols, la lipogenèse hépatique et la polarisation des cellules immunitaires.

LXR alpha/NR1H3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nr1h3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LXR alpha/NR1H3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nr1h3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nr1h3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LXR alpha/NR1H3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nr1h3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LXR alpha/NR1H3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LXR alpha/NR1H3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Nr1h3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.