Plasmide CRISPR d'Activation (h) Lutropin β: sc-403297-ACT

LHB code la sous-unité bêta de l’hormone lutéinisante (lutropine bêta), une hormone glycoprotéique hypophysaire qui s’hétérodimérise avec la sous-unité alpha commune pour former une LH bioactive. La signalisation de la LH via le récepteur LHCGR régule la stéroïdogenèse, l’ovulation et la fonction lutéale au moyen de programmes transcriptionnels dépendants de l’AMPc/PKA et de boucles de rétrocontrôle endocrinien en aval. Des altérations de l’expression de LHB ou de la dynamique de signalisation des gonadotropines sont associées à des dysfonctionnements de l’axe reproducteur, notamment des troubles du développement pubertaire, l’infertilité et des phénotypes endocriniens ovariens ou testiculaires. LHB constitue donc une cible utile pour étudier la différenciation des cellules hypophysaires, la biosynthèse et la sécrétion hormonales, ainsi que les réseaux de signalisation régulés par les gonadotropines.

Lutropin β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LHB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Lutropin β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LHB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LHB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Lutropin β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LHB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Lutropin β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Lutropin β dans les cellules tumorales présentant une expression de LHB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.