Plasmide Double Nickase (h) LTBP-2: sc-403182-NIC

LTBP2 code la latent transforming growth factor beta binding protein 2 (LTBP-2), une grande glycoprotéine de la matrice extracellulaire associée aux microfibrilles, qui contribue à l’assemblage des fibres élastiques et à l’architecture de la matrice. Bien qu’elle ne se lie pas de façon covalente au TGF-β latent de la même manière que certains autres membres de la famille LTBP, LTBP-2 influence la séquestration dans la matrice extracellulaire et la présentation de signaux qui recoupent les voies liées au TGF-β, la mécanotransduction et le remodelage tissulaire. Elle est exprimée dans les tissus conjonctifs, où elle soutient l’intégrité structurelle des matrices adjacentes à la membrane basale et régule les interactions cellule–matrice. Des variations génétiques ou une dérégulation de LTBP2 ont été associées à des troubles impliquant des défauts oculaires et du tissu conjonctif, notamment des phénotypes liés au glaucome et des anomalies dans des tissus riches en microfibrilles.

LTBP-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LTBP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LTBP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LTBP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LTBP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.