Plasmide Double Nickase (h) Lsk: sc-403533-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Lsk correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Lsk Double Nickase (h) et le plasmide Lsk Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MATK. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Lsk/Ctk Antibody (H-1): sc-271174
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Lsk | sc-403533-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Lsk | sc-403533-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MATK code la tyrosine kinase non réceptrice Lsk, un régulateur cytoplasmique de la signalisation, particulièrement exprimé dans les contextes hématopoïétiques et épithéliaux. Lsk module des réseaux dépendants de la phosphorylation qui recoupent les kinases de la famille Src et la signalisation proximale des récepteurs, influençant des processus tels que le contrôle de la croissance cellulaire, la différenciation et la signalisation en réponse au stress. MATK a été impliqué dans l’ajustement de voies pilotées par des kinases, pertinentes pour des états de signalisation oncogénique, ce qui en fait une cible utile pour l’étude de circuits de phosphorylation dérégulés en biologie du cancer et dans des modèles de spécification de lignage. L’analyse de la fonction de MATK soutient une exploration mécanistique du dialogue entre kinases et du remodelage des voies de signalisation dans les cellules humaines.
Lsk Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MATK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MATK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MATK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MATK.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.