LSDP5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426297

Panoramica

La perilipina 5 (Plin5), nota anche come proteina 5 delle gocce di accumulo lipidico (LSDP5), è una proteina associata alle goccioline lipidiche che regola l’immagazzinamento intracellulare dei triacilgliceroli e coordina il traffico degli acidi grassi verso i mitocondri per la β‑ossidazione. Nei tessuti ossidativi del topo, come cuore, fegato e muscolo scheletrico, PLIN5 contribuisce a bilanciare la sequestrazione dei lipidi con la lipolisi modulando l’accesso delle lipasi alla superficie della gocciolina e accoppiando la mobilizzazione dei lipidi alla capacità ossidativa mitocondriale. Attraverso queste funzioni, PLIN5 influenza l’omeostasi energetica, la segnalazione indotta dai lipidi e le risposte cellulari alla disponibilità di nutrienti e al digiuno. La disregolazione delle dinamiche delle goccioline lipidiche legate a PLIN5 è rilevante in modelli sperimentali di steatosi, insulino‑resistenza e stress lipotossico che compromettono la funzione mitocondriale e fenotipi metabolici associati all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LSDP5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Plin5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Plin5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Plin5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LSDP5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Plin5 per lo studio della segnalazione di LSDP5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Plin5 critici per la funzione di LSDP5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Plin5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LSDP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LSDP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Plin5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LSDP5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LSDP5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Plin5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Plin5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.