LSDP5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426297

Descripción general

La perilipina 5 (Plin5), también conocida como proteína 5 de las gotas de almacenamiento lipídico (LSDP5), es una proteína asociada a las gotas lipídicas que regula el almacenamiento intracelular de triacilglicéridos y coordina el tráfico de ácidos grasos hacia las mitocondrias para la β-oxidación. En tejidos oxidativos de ratón como el corazón, el hígado y el músculo esquelético, PLIN5 ayuda a equilibrar el secuestro de lípidos con la lipólisis al modular el acceso de las lipasas a la superficie de la gota y al acoplar la movilización de lípidos a la capacidad oxidativa mitocondrial. A través de estas funciones, PLIN5 influye en la homeostasis energética, la señalización inducida por lípidos y las respuestas celulares a la disponibilidad de nutrientes y al ayuno. La desregulación de la dinámica de las gotas lipídicas vinculada a PLIN5 es relevante en modelos experimentales de esteatosis, resistencia a la insulina y estrés lipotóxico que afectan la función mitocondrial y fenotipos metabólicos asociados a la inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LSDP5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Plin5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Plin5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Plin5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LSDP5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Plin5 para la investigación de la señalización de LSDP5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Plin5 críticos para la función de LSDP5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Plin5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LSDP5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LSDP5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Plin5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LSDP5 (m) y el plásmido HDR LSDP5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Plin5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Plin5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.