LRSAM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407099

Übersicht

LRSAM1 (leucine rich repeat and sterile alpha motif containing 1) kodiert eine zytosolische RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase, die durch Interaktionen mit TSG101 und weiteren Komponenten der ESCRT-Maschinerie zur ubiquitinabhängigen Proteinkontrolle (Proteinqualitätskontrolle) und zum endosomalen Transport beiträgt. Durch die Regulation der Ubiquitinierung und des Abbaus spezifischer Substrate beeinflusst LRSAM1 die intrazelluläre Sortierung, Membrandynamik und neuronale Homöostase. Eine Störung der LRSAM1-Funktion wurde mit peripheren Neuropathien, einschließlich der Charcot-Marie-Tooth-Erkrankung Typ 2P, in Verbindung gebracht und unterstreicht damit die Bedeutung des Proteins für den Erhalt von Axonen und für Proteostase-Signalwege. LRSAM1 ist daher für Studien zur Ubiquitin-Signalgebung, zum Vesikeltransport und zu zellulären Stressantworten im Zusammenhang mit Neurodegeneration von Interesse.

Das LRSAM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LRSAM1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LRSAM1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LRSAM1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LRSAM1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LRSAM1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LRSAM1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LRSAM1-Exone abzielen, die für die LRSAM1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LRSAM1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LRSAM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LRSAM1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LRSAM1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LRSAM1 HDR-Plasmid (h) und LRSAM1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LRSAM1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LRSAM1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.