LRP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400844

Übersicht

LRP6 (low-density lipoprotein receptor-related protein 6) ist ein Single-Pass-Transmembran-Korezeptor, der für die kanonische Wnt/β-Catenin-Signalübertragung essenziell ist. Er bildet ligandeninduzierte Komplexe mit Frizzled-Rezeptoren, fördert dadurch die Rekrutierung von Dishevelled und hemmt den β-Catenin-Destruktionskomplex. Über diesen Signalweg reguliert LRP6 die embryonale Musterbildung, die Aufrechterhaltung von Stammzellen, Zellproliferation und Differenzierung und kann Signale extrazellulärer Antagonisten wie DKK und Sclerostin integrieren, die die Verfügbarkeit des Rezeptors modulieren. Eine veränderte Aktivität oder Expression von LRP6 wurde mit einer Fehlregulation der Wnt-Signalgebung in unterschiedlichen Kontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebsbiologie, Knochen- und Stoffwechselphänotypen sowie neuroentwicklungsbezogene Prozesse. Als membrannaher Signalknoten wird LRP6 häufig untersucht, um Rezeptor-Trafficking, die Assemblierung von Signalosomen und Signalweg-Crosstalk zu analysieren, der die β-Catenin-abhängigen Transkriptionsprogramme beeinflusst.

Das LRP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LRP6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LRP6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LRP6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LRP6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LRP6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LRP6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LRP6-Exone abzielen, die für die LRP6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LRP6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LRP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LRP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LRP6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LRP6 HDR-Plasmid (h) und LRP6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LRP6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LRP6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.