LRP4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401708-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- LRP4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- LRP4ダブルニカースプラスミド（h）およびLRP4ダブルニカースプラスミド（h2）は、LRP4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
LRP4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401708-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LRP4 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401708-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LRP4（low-density lipoprotein receptor–related protein 4）はLDL受容体ファミリーに属する一回膜貫通型受容体であり、細胞表面における細胞外リガンドとの相互作用およびシグナル伝達のための主要な足場として機能する。神経筋接合部では、LRP4がアグリンに結合し、MuSKと協調して受容体のクラスター形成とシナプス後部の特殊化を開始することで、細胞外からの刺激を細胞骨格の組織化およびシナプス形成へと結び付ける。骨生物学においては、LRP4はスクレロスチンやDKK1などの分泌性Wnt拮抗因子と相互作用することによりWnt/β-カテニンシグナルを調節し、骨芽細胞活性や骨量の制御に影響を与える。LRP4の遺伝学的な異常は先天性の神経筋および骨格の表現型と関連づけられており、シナプス発生や骨リモデリング機構の研究における重要な標的となっている。
LRP4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LRP4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LRP4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LRP4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LRP4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。