Particules Lentivirales d'Activation (m) LONP1: sc-428748-LAC

Lonp1 code pour LONP1, une protéase à sérine ATP‑dépendante de la matrice mitochondriale, qui couple le contrôle qualité des protéines à la protéostasie de l’organite. LONP1 reconnaît et dégrade les protéines mitochondriales oxydées ou mal repliées, soutient le renouvellement des composants de la chaîne respiratoire et contribue au maintien de l’ADN mitochondrial (ADNmt) ainsi qu’à la fonction du ribosome mitochondrial en situation de stress. Par ses rôles dans la signalisation de la réponse mitochondriale aux protéines mal repliées, la phosphorylation oxydative et l’homéostasie rédox, une activité altérée de LONP1 est associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale affectant le métabolisme énergétique et la tolérance cellulaire au stress. Dans les modèles murins, Lonp1 est souvent étudié dans des contextes où la protéostasie mitochondriale croise la neurodégénérescence, le remodelage cardiométabolique et les déclins liés au vieillissement des fonctions mitochondriales.

Les particules d'activation lentivirales LONP1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Lonp1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales LONP1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Lonp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de LONP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Lonp1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.